在这项研究中设计了一种全细胞生物催化剂，以实现甜菊醇在酿酒酵母中糖基化为Rub。主要使用蔗糖合酶（Sucrose synthases）构建UDP-Glucose再生系统，并与来自多个植物物种的不同UGT酶进行组合测试。在优化反应条件后，对SrUGT74G1中可能影响糖基化效率的残基进行定点诱变。S84A/E87A的双突变减少了中间体的积累，最终将1.27 g/L甜菊醇葡萄糖基化为0.45 ±0.06 g/L甜菊糖单苷（转化率23.3%）和1.92 ±0.17 g/L Rub（转化率74.9%）。无需提供额外的UDPG即可实现Rub生物合成的高效率。这项工作作为全细胞生物催化中多步糖基化反应的第一个例子，为未来二萜甜味剂的可扩展生产奠定了基础。

在S. c. WAT11中导入UGT酶后，在含蔗糖（0-40%）的磷酸缓冲液中全细胞催化1.2 g/L底物甜菊醇（Steviol，SV），仅有少量产物产生；

原文链接：https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.jafc.1c04873

作者：yockoo