锐谈 | Biotechnol Bioeng：利用无细胞蛋白合成与分离式GFP相结合的策略可快速表达并定量数十种候选酶

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分类：新闻动态
作者：木冰衿
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发布时间：2023-04-18 15:38
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近日，华南理工大学与清华大学于《Biotechnology & Bioengineering》合作发表题为“Rapid prototyping enzyme homologs to improve titer of nicotinamide mononucleotide using a strategy combining cell‐free protein synthesis with split GFP”的研究论文。

该研究将荧光蛋白GFP分成两个部分， GFP1-10和GFP11。两个部分不会单独发出荧光，但它们可以自发地相互作用形成有荧光的GFP。将GFP11部分的16个氨基酸融合到目标蛋白基因的末端，并通过无细胞蛋白合成技术表达后，再加入单独表达纯化的GFP1-10即可实现荧光定量，从而精确定量目标蛋白浓度。该研究耗时仅16小时，不仅省却了传统蛋白表达的培养、诱导、收集、破碎等冗杂步骤，更有效解决了粗酶定量的难题。

该研究为同功能酶的筛选提供了一种快速简便的方法，尤其适合于对数十种同功能酶进行初步定量筛选，以寻找具有较高催化活性的候选酶。此外，若将该研究与高通量自动化平台相结合，可进一步提高同功能酶筛选效率。